紫外可見分光光度計(jì)的工作原理主要是基于朗伯-比耳定律。18世紀(jì)初，瑯伯在前人的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)厚度的關(guān)系，并于1760年指出：如果溶液的濃度一定，則光對(duì)物質(zhì)的吸收程度與它通過的溶液厚度成正比，這就是朗伯定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：
A=lgI。/I=K。b
式中，A為吸光度；
I為入射光強(qiáng)度；
I為透射光強(qiáng)度；
b為液層厚度（即光程）；
K為比例常數(shù)。
1852年，比耳研究了各種無機(jī)鹽的水溶液對(duì)紅光的吸收后指出：光的吸收和光所遇到的吸光度的數(shù)量有關(guān)；如果吸光物質(zhì)于不吸光的溶劑中，則吸光度和吸光物質(zhì)的濃度成正比，這就是比耳定 律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：
A=lgI。/I=K1C
式中，A為吸光度；
I為入射光強(qiáng)度；
I為透射光強(qiáng)度；
C為溶液的濃度；
K1為比例常數(shù)。
將朗伯定律和比耳定律結(jié)合起來，則為朗伯-比耳定律，公式如下：
A=lgI。/I=K2bC
式中，A為吸光度；
I為入射光強(qiáng)度；
I為透射光強(qiáng)度；
C為溶液的濃度；
b為液層厚度（即光程）；
K2為比例常數(shù)。
朗伯-比耳定律認(rèn)為：當(dāng)一束光平行的單色光通過某一均勻的有色溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度和光程的乘積成正比，這就是朗伯-比耳定律的真正物理意義，它是光度分析中定量分析的最基礎(chǔ)、最根本的依據(jù)，也是紫外可見分光光度計(jì)的基本原理。
分光光度計(jì)正是根據(jù)朗伯-比耳定律，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量和定性分析的。
